美國(guó)SONICS超聲波處理器
超聲波石墨烯分散儀 VCX500，可安全處理各種有機(jī)和無(wú)機(jī)材料，從250微升升至1升*。典型應(yīng)用包括納米技術(shù)（生產(chǎn)納米顆粒材料和石墨烯分散體），細(xì)胞裂解，樣品制備，均質(zhì)化，ChIP測(cè)定，乳化，解聚和解聚，以及聲化學(xué)液體處理領(lǐng)域的應(yīng)用。
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超聲波石墨烯分散儀 VCX500，可安全處理各種有機(jī)和無(wú)機(jī)材料，從250微升升至1升*。典型應(yīng)用包括納米技術(shù)（生產(chǎn)納米顆粒材料，石墨烯分散體，剝離），細(xì)胞裂解，樣品制備，均質(zhì)化，ChIP測(cè)定，乳化，解聚和解聚，以及聲化學(xué)液體處理領(lǐng)域的應(yīng)用。
◆能量監(jiān)視器
◆集成溫度控制器防止樣品過(guò)熱，監(jiān)測(cè)并控制樣品處理溫度在1℃至100℃范圍內(nèi)
◆數(shù)字電表
◆基于微處理器和可編程
◆10小時(shí)流程計(jì)時(shí)器
◆獨(dú)立開/關(guān)脈沖發(fā)生器
◆可變功率輸出控制
實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>
1、了解超聲細(xì)胞破碎的基本原理
2、掌握超聲細(xì)胞破碎的基本技術(shù)
實(shí)驗(yàn)原理
強(qiáng)聲波作用溶液時(shí)，氣泡產(chǎn)生、長(zhǎng)大和破碎的空化現(xiàn)象有關(guān)，空化現(xiàn)象引起的沖擊波和剪刀力使細(xì)胞裂解。
材料和試劑
細(xì)菌10ml、燒杯、刨冰、75％酒精棉球。
| 探頭型號(hào)大小 | 破碎細(xì)胞容量 |
| 2mm | 150ul－5ml |
| 3mm | 200ul－10ml |
| 6mm | 10ml－50ml |
| 10mm | 50ml－250ml |
| 13mm | 200ml－1000ml |
| 型號(hào) | VCX 500 |
| 頻率 | 20KHz |
| 功率 | 500W |
| 標(biāo)配變幅桿 | Φ13mm |
| 標(biāo)配變幅桿處理量 | 50ml至250ml |
| 標(biāo)配變幅桿長(zhǎng)度 | 136mm |
| 變幅桿整體尺寸 | 235 x 190 x 340 mm |
| 變幅桿材質(zhì) | 鈦合金Ti-6Al-4V |
| 可選變幅桿 | Φ13mm,Φ19mm,Φ25mm |
| 變幅桿重量 | 900g |
| 變幅桿電纜長(zhǎng)度 | 1.8m |
| 破碎容量 | 50-1000ml |
| 占空比 | 1-99% |
| 功率調(diào)節(jié)范圍 | 連續(xù)可調(diào)（20-500w） |
| 間隙時(shí)間 | 0.1-99.9s |
| 溫度保護(hù)設(shè)定 | 有,能量和溫度設(shè)定點(diǎn)控制（溫度探頭需加配） |
| 功率振幅顯示 | 有 |
| 工作頻率范圍 | 能量監(jiān)視器數(shù)字式瓦特計(jì)自動(dòng)調(diào)諧自動(dòng)振幅補(bǔ)償 |
| 工作時(shí)間 | 基于微處理器的-可編程的10小時(shí)計(jì)時(shí)器1 - 59秒獨(dú)立于/關(guān)閉脈沖 |
| 超聲時(shí)間 | 從1秒到10小時(shí) |
| 工作模式 | 間隙/連續(xù) |
| 電源 | 220/110V 50Hz/60Hz或者 除非有其他要求，否則電要求以117V、50/60Hz發(fā)送 |
| 凈重 | 6.8kg |
| 主機(jī)+換能器重量 | 3680g |
| 超聲波發(fā)生器 | 一臺(tái) |
| 隔音箱 | 選購(gòu) |
| 工具箱 | 第88 - 00041轉(zhuǎn)換器和一個(gè)紅色的扳手 |
| 工具箱 | 第88 - 00026和一個(gè)藍(lán)色扳手 |
| 電源線 | 一根 |
| 溫度探頭 | 不銹鋼材料（可選附件），編號(hào)830-00060 |
| 專用破碎杯 | 選購(gòu) |
| 使用說(shuō)明書 | 一份 |
| 備注說(shuō)明 | 除非另有要求，運(yùn)輸完成并準(zhǔn)備使用帶有可更換尖端的1/2“（13 mm）探頭，**工具包和使用手冊(cè)。**處理含有機(jī)溶劑或低表面張力液體的樣品時(shí)，請(qǐng)勿使用具有可更換尖端的探頭。使用固體探頭零件號(hào)630-0219。除非另有要求，所提供的探頭將具有可更換的尖端。 |
| 謹(jǐn)慎 | 所有的探測(cè)器，包括那些有可替換的尖端的探測(cè)器，都能在20khz共振。如果可替換的提示被刪除或刪除與探測(cè)器的其余部分分離，這個(gè)元素將不再共振20千赫，而電源將進(jìn)入一個(gè)過(guò)載條件，關(guān)閉或失敗。有機(jī)溶劑(如。和低表面張力液體穿透探測(cè)器和可更換的尖端之間的接口，從而將微粒帶進(jìn)螺紋部分并將尖端從探針中分離出來(lái)。當(dāng)處理含有有機(jī)溶劑或低表面張力的樣品時(shí)液體，總是使用固體探測(cè)器或作為一個(gè)備用的全波10(254毫米)探測(cè)器或擴(kuò)展器。 |
細(xì)胞破碎的方法:
一、機(jī)械破碎法：是指利用搗碎機(jī)、研磨器或勻漿器 等將細(xì)胞破碎開來(lái) 。
1. 高速組織搗碎：將材料配成稀糊狀液，放置于筒內(nèi)約1/3體積，蓋緊筒蓋，將調(diào)速器先撥至最慢處，開動(dòng)開關(guān)后，逐步加速至所需速度。此法適用于動(dòng)物內(nèi)臟組織、植物肉質(zhì)種子等。
2. 玻璃勻漿器勻漿：先將剪碎的組織置于管中，再套入研桿來(lái)回研磨，上下移動(dòng)，即可將細(xì)胞研碎，此法細(xì)胞破碎程度比高速組織搗碎機(jī)為高，適用于量少和動(dòng)物臟器組織。
二、物理破碎法：指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細(xì)胞破碎開來(lái)。
1：用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂(借助超聲的震動(dòng)力破碎細(xì)胞壁和細(xì)胞器）。
機(jī)制：可能與強(qiáng)聲波作用溶液時(shí)，氣泡產(chǎn)生、長(zhǎng)大和破碎的空化現(xiàn)象有關(guān)，空化現(xiàn)象引起的沖擊波和剪刀力使細(xì)胞裂解。
超聲波破碎的效率取決于聲頻、聲能、處理時(shí)間、細(xì)胞濃度和細(xì)胞類型等。（使用時(shí)注意降溫，防止過(guò)熱）。
2. 高壓破碎：細(xì)胞懸浮液從高壓室的環(huán)狀隙噴射到靜止的撞擊環(huán)上，被迫改變方向經(jīng)出口管流出。此過(guò)程中細(xì)胞經(jīng)歷了高速造成的剪切的碰撞及高壓到常壓的變化，從而破碎釋放內(nèi)含物。
這是一種溫和的、徹底破碎細(xì)胞的較理想的方法。
3. 反復(fù)凍融法：將細(xì)胞在-20度以下冰凍，室溫融解，反復(fù)幾次，由于細(xì)胞內(nèi)冰粒形成和剩余細(xì)胞液的鹽濃度增高引起溶脹，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎。
三、化學(xué)破碎法：指利用甲醛、丙酮等有機(jī)溶劑或表面活性劑作用于細(xì)胞膜，使細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)遭到破壞或透性發(fā)生改變 。
有些動(dòng)物細(xì)胞，例如腫瘤細(xì)胞可采用十二烷基磺酸鈉（SDS）、去氧膽酸鈉等細(xì)胞膜破壞。濃度一般為1mg/ml。
四、酶學(xué)破碎法 ：選用合適的酶，使細(xì)胞壁遭到破壞，進(jìn)而在低滲溶液中將原生質(zhì)體破碎開來(lái)。
細(xì)菌細(xì)胞壁較厚，可采用溶菌酶處理效果更好。
裂解液標(biāo)準(zhǔn)配方: ：50mM Tris-HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml溶菌酶。(溶菌酶在這個(gè)pH范圍內(nèi)比較好發(fā)揮作用) 。
綜合敘述：無(wú)論用哪一種方法破碎組織細(xì)胞，都會(huì)使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)或核酸水解酶釋放到溶液中，使大分子生物降解，導(dǎo)致天然物質(zhì)量的減少，加入二異丙基氟磷酸（DFP）可以抑制或減慢自溶作用；加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性，加入苯甲磺酰氟化物（PMSF）也能清除蛋白水解酶活力，但不是全部，而且應(yīng)該在破碎的同時(shí)多加幾次；另外，還可通過(guò)選擇pH、溫度或離子強(qiáng)度等，使這些條件都要適合于目的物質(zhì)的提取。
使用前注意事項(xiàng)：
1．根據(jù)所處理的樣本體積選擇適當(dāng)探頭，使用前后均須用酒精棉球擦洗探頭，換探頭須剛專用扳手更換；
2．AMPLITUDE旋鈕打開時(shí)，探頭不得在空氣中暴露，特殊情況下(測(cè)試探頭)不應(yīng)超過(guò)10秒；
3．使用前準(zhǔn)備好冰盒，樣品處理時(shí)必須置于冰浴中，樣品濃度不可過(guò)大。
